Méthode Les acides aminés peuvent être séparés suivant leur $pI$ ( → point isoélectrique ) sur une colonne chromatographique préparée de telle manière que des ions positifs s'y fixent préférentiellement en échange d'ions sodium:
Le mélange 0 à analyser est déposé en haut de la colonne 2. L'éluant 1 est souvent propulsé sous pression (HPLC). Les acides aminés 3, 4 et 5 descendent avec une vitesse différente.
Les acides aminés - ayant des valeurs de $pI$ supérieures au pH de l'éluant ont plutôt une charge globale positive: Ils collent mieux sur le support et descendent moins vite. - ayant des valeurs de $pI$ inférieures au pH de l'éluant ont une charge globale plutôt négative: Ils ne collent guère sur le support et descendent vite avec l'éluant.
La colonne La colonne est souvent un dérivé sulfoné du polystyrène qui cède facilement ses ions $Na^+$ tout en attirant puissamment des acides aminés chargés positivement:
Perfectionnement L'éluant est souvent propulsé sous pression (Méthode HPLC). D'autre part on peut changer progressivement son $pH$ de telle manière qu'une partie différente des acides aminés est entraînée à chaque fois l'autre restant en début de colonne. La détection se fait en mesurant l'absorbance avec une longueur d'onde appropriée:
